Скачать документ

Приложение 3

к приказу департамента

здравоохранения и фармации

Ярославской области

от 21.07.2009 г. № 834

МЕТОДИЧЕСКОЕ ПИСЬМО

ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕЦИИ

Основные методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции включают выявление вирусных антигенов и антител к ВИЧ. Специфические антитела к ВИЧ образуются вскоре после инфицирования, однако точное время их появления зависит от характеристики организма хозяина и вируса. Антитела могут присутствовать на ранних стадиях инфекции, но их концентрация может быть ниже предела чувствительности используемых методов. Тесты третьего поколения с использованием сэндвича антигенов, могут выявлять антитела уже через 3 – 4 недели после инфицирования. Скрытый период (период «окна») можно сократить на несколько дней, используя тесты для выявления антигена, и ещё на несколько дней путём определения провирусной ДНК вируса. Поэтому период «окна» может иметь продолжительность 2 – 3 недели. Тесты последнего поколения, выявляющие одновременно антигены и антитела к ВИЧ, позволяют ещё более повысить чувствительность метода.

Стандартным методом диагностики ВИЧ-инфекции служит определение антител к ВИЧ с помощью ИФА. Метод широко используется для скрининга на наличие антител к ВИЧ, обладает высокой чувствительностью (более 99,5%) и пригоден для исследования большого числа образцов. Принцип иммуноферментного анализа основан на выявлении комплекса антиген-антитело с помощью фермента (пероксидаза, щелочная фосфатаза и др.) по изменению окраски специфического субстрата.

Новое поколение комбинированных ИФА-тестов одновременно выявляет антиген и антитела. Их преимуществом является сокращение времени, необходимого для анализа, снижение трудозатрат и большая экономичность по сравнению с тем, когда каждый из анализов выполняется индивидуально.

Быстрые тесты

Быстрые тесты для определения специфических антител к ВИЧ – это тесты, которые можно выполнить менее чем за 30 минут. При правильном использовании быстрые тесты на антитела к ВИЧ являются точными и имеют широкое распространение:

- трансплантология (перед забором материала),

- эпидемиологический надзор (обследование труднодоступных групп населения);

- обследование крови в случае экстренного переливания препаратов крови и отсутствия обследованной на антитела к ВИЧ крови;

- тестирование на ВИЧ, если требуется немедленное начало медикаментозной профилактики ВИЧ в случае аварийной ситуации;

- тестирование беременных женщин с неизвестным ВИЧ-статусом в предродовом периоде.

Виды быстрых тестов:

- Мембранные устройства для концентрации иммунного материала.

- Иммунохроматографический метод (латеральная диффузия).

Иммунный блот

Иммунный блот (ИБ) представляет собой наиболее широко применяемый подтверждающий метод для выявления антител к ретровирусам. Принцип метода заключается в выявлении антител к определенным белкам вируса, иммобилизованным на нитроцеллюлозную мембрану.

Сбор, хранение и транспортировка образцов для проведения исследования

Забор крови для серологического исследования на антитела к ВИЧ производится из локтевой (или другой) вены в чистую сухую пробирку в количестве 3-5 мл. Полученный материал (цельную кровь) нельзя замораживать, не рекомендуется хранить более 12 часов при комнатной температуре и более 1 суток в холодильнике при 4-8° С. Сыворотка отделяется центрифугированием или обводкой по стенке пробирки пастеровской пипеткой или стеклянной палочкой. Отделенная сыворотка переносится в чистую (лучше стерильную) пробирку, флакон или пластиковый контейнер, и в таком виде хранится до 7 дней при температуре 4-8° С, в замороженном виде – несколько лет. При работе следует соблюдать правила техники безопасности согласно Санитарным правилам «Безопасность работы с микроорганизмами III и IV групп патогенности и гельминтами» (постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации №4 от 03 февраля 1999 года).

Диагностический алгоритм тестирования на наличие антител к ВИЧ Обнаружение антител к ВИЧ включает два этапа:

I этап (скриниговая лаборатория) - выявление суммарного спектра антител против антигенов ВИЧ с использованием различных тестов (иммуноферментных, агглютинационных, комбинированных, гребеночных, мембранно-фильтрационных или мембранно-диффузных).

Если получен положительный результат, анализ проводится последовательно еще 2 раза с той же сывороткой и в той же тест-системе. Если при этом был получен еще хотя бы один положительный результат (два положительных результата из трех постановок в ИФА) сыворотка считается первичноположительной и направляется в референс-лабораторию для дальнейшего исследования.

II этап (референс-лаборатория). В референс-лаборатории первичноположительная сыворотка повторно исследуется в ИФА в другой (второй) тест-системе, выбранной для подтверждения. При получении положительного результата анализа и во второй тест-системе сыворотку необходимо исследовать в ИБ.

При получении отрицательного результата анализа и во второй тест-системе сыворотка повторно исследуется в третьей тест-системе. В случае получения отрицательного результата анализа во второй, и в третьей тест-системе выдается заключение об отсутствии антител к ВИЧ. При получении положительного результата в третьей тест-системе сыворотка направляется на исследование в ИБ.

Результаты, полученные в подтверждающем тесте (ИБ), интерпретируются как:

- положительные (позитивные) – это пробы, в которых обнаруживаются антитела к 2 или 3 гликопротеинам ВИЧ. При получении положительного результата делается заключение о наличии в исследуемом материале антител к ВИЧ.

- отрицательные (негативные) – это пробы, в которых не обнаруживается антител ни к одному из антигенов (белков) ВИЧ или имеется слабое реагирование с белком р18. При получении отрицательного результата выдается заключение об отсутствии в исследуемом материале антител к ВИЧ.

- неопределенные (сомнительные) – пробы, в которых обнаруживаются антитела к одному гликопротеину ВИЧ и/или каким-либо протеинам ВИЧ. При получении неопределенного результата проводятся повторные исследования на антитела к ВИЧ в зависимости от белкового профиля.

При получении белкового профиля, включающего белки сердцевины (gag), проводится исследование для диагностики ВИЧ-2. При получении «подозрительного белкового профиля» необходимо повторить исследования через 2 недели, затем через 3 месяца от момента первого исследования. Если через 3 или 6 месяцев получен отрицательный результат в ИФА, то дальнейшее исследование не требуется. Если через 6 месяцев после первого обследования вновь будут получены неопределенные результаты, а у пациента не будут выявлены факторы риска заражения и клинические симптомы ВИЧ-инфекции, результат расценивается как ложноположительный. При наличии эпидемиологических и клинических показаний серологические исследования повторяются по назначению.

При возможности используют дополнительные методы диагностики (определение р24 антигена или ПЦР исследования). Если был выявлен антиген р24 или ДНК/РНК ВИЧ, повторное обследование на наличие антител проводится через 2 недели и далее через каждые 2 недели до получения положительного результата в подтверждающем тесте.

Основание:

1. Приложение 1 к приказу Министерства здравоохранения и медицинской промышленности Российской Федерации от 16 августа 1994 года № 170 «О мерах по совершенствованию профилактики и лечения ВИЧ-инфекции в Российской Федерации».

2. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 30 июля 2001 года № 292 «Об использовании иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ в сыворотке крови человека».

3. Методическое письмо Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 14 августа 2006 года № 4174-РХ «Проведение лабораторного обследования на ВИЧ-инфекцию (в том числе исследование иммунитета и вирусной нагрузки при ВИЧ-инфекции)».

ПЕРЕЧЕНЬ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРИЙ, ПРОВОДЯЩИХ ИММУНОФЕРМЕНТНЫЕ АНАЛИЗЫ (ИФА) НА ВИЧ И ПРИКРЕПЛЕННЫХ К НИМ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ УЧРЕЖДЕНИЙ

 Лаборатория

  ЛПУ,  прикрепленные к лаборатории

 

Клинико-диагностическая лаборатория   ГУЗ ЯО Центр СПИД

ЛПУ г. Ярославля, областные лечебно-профилактические учреждения,    Ярославская ЦРБ

Лаборатория  клинической иммунологии ГУЗ ЯО «Областная клиническая больница»

  ГУЗ ЯО «Областная клиническая больница»,

  Ярославская ЦРБ,   Большесельская ЦРБ,

  Борисоглебская ЦРБ,  Гаврилов-Ямская ЦРБ,

  Даниловская ЦРБ,  Любимская ЦРБ,

  Некоузская ЦРБ,  Некрасовская ЦРБ,

  Пречистенская ЦРБ,  Пошехонская ЦРБ,

  Тутаевская ЦРБ

 Иммунологическая лаборатория ГУЗ ЯО «Рыбинская станция переливания крови»

Лечебно-профилактические учреждения                 города  Рыбинска, МУЗ «Рыбинская центральная районная поликлиника»

Иммунологическая лаборатория  диагностики СПИД  Ростовская ЦРБ

 Ростовская ЦРБ

 

Клинико-диагностическая лаборатория  диагностики ВИЧ-инфекции МУЗ Угличская ЦРБ

 Угличская ЦРБ,  Брейтовская ЦРБ,

  Мышкинская ЦРБ

 

Клинико-диагностическая лаборатория  диагностики ВИЧ-инфекции Городской больницы города Переславля-Залесского

Городская больница города Переславля-Залесского, Переславский муниципальный район

 Клинико-диагностическая  лаборатория диагностики ВИЧ-инфекции ГУЗ ЯО «Областная станция переливания крови»

 Донорская кровь, заготовленная в выездных условиях и в стационарах Ярославской области, а также от отделений заготовки крови и её компонентов (ОЗК) №1, №2, №3